Producción y purificación parcial de la hemolisina principal de Streptococcus pneumoniae

HEMOLISINA  anticuerpo que se encunçentra en el suero de la sangre y tiene la propiedad de fijarse por intermedio del complemento el los glóbulos rojos del animal y destruirlos por una especie de disolución

Se investigó la capacidad para producir la neumolisina de 36 cepas cubanas de Streptococcus pneumoniae. Se determinó que 94,44 % de las cepas son productoras de la enzima. Una de las cepas mejor productora fue cultivada en mayor escala y la neumolisina presente en el sobrenadante fue parcialmente purificada a través de una cromatografía de intercambio iónico en columna mono-Q. Este método permitió la recuperación de la enzima con un incremento de 4,39 veces en el grado de pureza y un rendimiento de 100 %.
Descriptores DeCS: HEMOLISINAS/aislamiento & purificación; STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE/metabolismo.
El Streptococcus pneumoniae produce una hemolisina intracelular perteneciente a la familia de las hemolisinas tiol-dependientes, comúnmente denominada neumolisina. Ésta constituye la citolisina principal de S. pneumoniae y es conocida como uno de sus factores de virulencia y considerada por muchos investigadores como candidato antigénico para las técnicas serológicas empleadas en el diagnóstico de este microorganismo^1,2 (Kanclerski K. Streptococcus pneumoniae haemolysin [Pneumolysin]: production, purification and use as antigen for diagnosis of pneumococcal pneumonia. Reproprint Aktiebolag. Stockholm 1987).

Al igual que otras citolisinas tiol-dependientes, la neumolisina es una molécula antigénica e induce respuesta de anticuerpos en animales inmunizados. Se conoce también que los pacientes con infecciones por neumococo desarrollan anticuerpos para la neumolisina, por esta razón, disponer de un método sensible que permita la determinación de estos anticuerpos, constituiría una valiosa herramienta en el laboratorio clínico.

Según estudios realizados por Kanclerski y Mollby, la mayoría de las cepas de S. pneumoniae producen neumolisina y ésta puede ser obtenida en el laboratorio mediante el empleo de métodos simples de purificación.Las preparaciones de neumolisina producidas de esta forma pueden ser utilizadas como antígeno en sistemas inmunoenzimáticos (ELISA) u otros métodos serológicos para el diagnóstico de infecciones causadas por S. pneumoniae. Sin embargo, los primeros intentos por utilizarla como sustrato antigénico condujeron a métodos poco sensibles y de baja reproducibilidad.

Durante los últimos años, gracias al desarrollo de métodos serológicos más sensibles, renacen las espectativas de emplear la neumolisina en el diagnóstico de las infecciones neumocócicas y es también considerada como un elemento a ser incluido en una vacuna para humanos. El desarrollo de un conjugado neumolisina-polisacárido, a partir de tipos seleccionados de neumococo, podría ayudar a solucionar los problemas de la pobre inmunogenicidad de las vacunas hasta ahora ensayadas.
El objetivo del presente estudio fue investigar cómo se comportaba la producción de neumolisina en cepas de S. pneumoniae circulantes en Cuba, para seleccionar las mejores productoras y utilizarlas en la estandarización de un método para su obtención y purificación en el laboratorio.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-07601999000300004

COMENTARIO DE UN PREMIO ANTINOBEL

los premios antinobel se otorgan a aquellos descubrimiento cientificos poco relevantes

este año se le otorgo el premio de medicina

El Anti-Nobel de Medicina recompensó a un equipo holandés que presentó una cura del asma mediante un paseo en montaña rusa, por el "estrés emocional positivo" que produce.

considero que es muy interesante esta investigación por que ofrece una nueva alternativa a las personas asmaticas sin la necesidad de farmacos

y quizá en un futuro este principio nos ayude a fabricar una medicina que cure totalmete el problema del asma
ya que estas investigaciones por muy triviales que parescan tienen fundamentos cientificos por lo que no hay que cerrar la posobilidad de que estas sean piezas claves en algun decubrimiento

Fenilalanina

La fenilalanina es un aminoácido. Se encuentra en las proteína como L-fenilalanina (LFA), siendo uno de los diez aminoácidos esenciales para humanos. La fenilalanina es parte también de muchos psicoactivos.
La cadena lateral característica de este aminoácido contiene un anillo bencénico, y es por tanto uno de los aminoácidos aromáticos, su uso excesivo produce efectos Laxantes, junto con la tirosina y el triptófano. La L-fenilalanina se puede transformar, por medio de una reacción catalizada por la enzima fenilalanina hidroxilasa, en tirosina. La L-fenilalanina es también el precursor de las catecolaminas como la L-dopa (L-3,4-dihidroxifenilalanina), la norepinefrina y la epinefrina, a través de una etapa en la que se forma tirosina. Por otro lado, la L-fenilalanina se encuentra en la estructura de neuropéptidos como la somatostatina, vasopresina, melanotropina, encefalina, hormona adrenocorticotrópica (ACTH), angiotensina, sustancia P y colecistoquinina.
RIESGOS DE LA FENILALALINA
en mujeres embarazadas es preciso controlar las cantidades de fenilalanina en casos de que sean exesivas. Los niveles elevados de la fenilalanina en la sangre materna durante el ambarazo son nocivos para el feto.Puede producir en el bebe problemas cardiacos retraso en el crecimiento de la microcefalina (cerebro pequeño) asi como retraso metal.
las cantidades recomendadas para lactantes de 0 a 5 meses son de 47-900 mg/kg de masa y de 6 a 12 meses de 25 a 470 mg/kg de masa.En niños de 1 a 10 años los requerimientos aumentan 200 a500 mg al día
El consumo de grnades dosis de fenilalanina puede causar desde cambios de humor dolores de cabeza hasta crisis convulsivas.
La fenilalanina también esta presente en el aspartame un edulcorante artificial que se encuentra en los alimentos dieteticos y es muy habitual en las bebidas refrescantes .
Muchos chicles y caramelos sin azucar también  contienen aspartame por los que las personas que padecen tçde fenilcetonuria deben leer las etiquetas de los productos.
los productos que contienen fenilalalina como regla oficial en su composición deben indicar en las etiquetas las presencia de esta sustancia.
La dieta de las personas con fenilcetonuria consiste mas bien en una dieta vegetariana ya que los alimentos de origen animal que contienen mayor contenido de fenilalalina. Las frutas y verduras contienen una media de 15 miligramos de este aminoacido por cada 100 gr mientras que los alimentos de origen animal contienen cantidad superior a 160 miligramos como es el caso de la leche entera.
La fenilcetonuria es una enfermedad de cuidados serios por lo que se debe cuidar de la etiquetas para evitar la desencadenada reacción.

ANESTESIA LOCAL

Los agentes anestesicos locales pueden utilizarse por medio de apliacación tópica o por infiltracion local es decir inyección directa al tejido como la piel o por debajo de ella. El uso clinico principal es bloquear las fibras nerviosas sensoriales por ende aliviar el dolor.
QUÍMICA
los anestesicos locales contiene una porción liposoluble (un radical éster o amida)y un grupo amino con hidrógenos sustituidos por radicales alquilo que tienden a no ser solubles ne lípidos

Los anestesicos locale spor lo general se emplean como clorhidratos. En esta forma salina su solubilidad con agua aumenta, permitiendo la preparación de soluciones concentradas (10 a 50 mg por ml. Algunos agentes (por ejemplo benzocaina) son muy insolubles y su uso esta restringido a accción tópica.

CARACTERISTICAS

Químicamente, los anestésicos locales son bases débiles cuya estructura consiste en un radical aromático ligado a una amida sustituido a través de un enlace éster (como la procaína) o amina (como la lidocaína).

Los factores que afectan el inicio de acción, intensidad y duración del bloqueo neuronal incluyen:

Liposolubilidad
Unión a proteínas
El pKa del AL que determina la velocidad del inicio del bloqueo
Disminución de pH tisular
Aumento de la dosis

MECANISMO DE ACCIÓN
todos loa anestesicos estabilizan las membranas al impedir que durante las despolarización ocurra un incremento transitorio en la permeabilidad de la membrana al Na. Estos agentes actúan tambien como depresores del musculo liso, cardiaco y esqueletico

SENCIBILIDAD DE LAS FIBRAS NERVIOSAS A LOS ANESTEISCOS LOCALES
los anestesicos locales penetran con facilidad a los nervios de diametro pequeño que son mas sencibles que los grandes. De nuevo los nervios no mielizados casi siempre son de diametro pequeño y mas sencibles que los que poseen vaína de mielina. la inhibición de la conducción neuronal sigue ,as o menos un orden( mas sencible a menos sencible):fibras del dolor de diametro pequeño no mielizadas y finalmente mielizadas y nervios autonomos posganglionares, nervios sensoriales de la temperatura, tacto propiocepción y tono muscular sómatico.

ABSORCIÓN
la absorción a la circulación general despúes de inyecciones regionales interesa profundamente.Ninguno de los anestesicos locales exepto cocaína inducen vasoconstricción por limitación de la acctividad del sistema nervioso simpatico. por tanto la itroducción de anestesicos locales sinteticos nueos pronto se reconoció que al agregarles un agente vasoconstricctor (como adrenalina) tenia afectos terapeuticos benéficios definitivos.
Un vasoconstrictor incremente la duración de efecto anestesico local al disminuir la velocidad de difusión desde el sitio de inyección.

TIPOS DE ANESTESICOS LOCALES

bENZOCAÍNA

Procaína

Tetracaína

Cacaína

Lidocaína

Mepivacaína

USOS CLINICOS

1Anestesia superficial pueden aplicarse a quemaduras o abrasiones. Penetran a la piel erosionada con lentitud y es posible usarlos con seguridad

2 Infiltración anestesica incluyendo inyecciones intredérmica subcutánea o ms profunda

3 Anestesia requidea esta via inhibe la conducción de nervios, ganglios y medula espinal

4Anestesia epidural

5 Anestesia caudal

TOXICOLOGÍA DE LOS ANESTESICOS LOCALES
La causa principal de reacciones tóxicas se relacionan con la sobre dosis y se debe a la absoción rapida desde el sitio de inyección.
los signos menos graves de toxicidad general incluyen parestesia peribucal, salivación , tinitus, ansiedad, temoblores, escalofríos, hipotensión, taquicardia, y defectos de la conducción cardiaca. Los sintomas graves de intoxicación de la mayor parte los anestesicos locales son convulsiones o colapso cardiovascular y respiratorio.

RIESGOS Y COMPLICACIONES DE LA ANESTESI LOCAL

Existen unos datos estándares sobre el período de latencia, duración y otros efectos de la anestesia que se hallan relacionados con cada producto anestésico, cada técnica anestésica y según el lugar a anestesiar. En lineas generales, la base del éxito de la anestesia reside en el depósito de suficiente cantidad de producto anestésico lo más cerca posible del nervio a anestesiar.
Se sabe que cuando más falla la anestesia local es en casos de endodoncias y drenaje e incisión de abscesos. Cuando están presentes infección e inflamación, la reabsorción intravascular del anestésico se ve acelerada y el bajo pH influye negativamente en su difusión. La aplicación repetida de anestesia puede inducir el fenómeno de taquifilaxia o tolerancia aguda manifestada por una disminución de respuesta a una dosis estándar de anestésico local, requiriéndose incrementar la dosis para mantener el mismo efecto analgésico; este es un fenómeno que interfiere a la hora de utilizar anestésicos locales durante largo tiempo en la práctica clínica. Aunque este efecto ha sido imputado al pH, no ha sido demostrado en todos los casos.
A) Técnica incorrecta.
B. Dependientes del individuo
Dependientes del producto
Dolor

El dolor a la inyección persiste co-mo una frecuente fuente de ansiedad para algunos pacientes. Los anestésicos tipo amida, por ejemplo la lidocaina y la bupivacaina, son conocidos por su propensión a causar disconfort cuando son infiltrados.

El dolor durante la administración del líquido anestésico puede estar producido por diferentes motivos: la punción y lesión de un determinado nervio ocasionará un dolor que persistirá horas o días, el desgarro de los tejidos gingivales y sobre todo del periostio es causa de molestias postoperatorias de intensidad variable; estos dolores postanestésicos hay que distinguirlos de los dolores postoperatorios.

Rotura de la aguja de inyección
Hematoma
Parálisis facial
Isquemia de la piel de la cara
Inyección de las soluciones anestésicas en los órganos vecinos
Accidentes oculares
Inyección intravascular

la desnaturalización es un cambio estructural de las proteínas o ácidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su óptimo funcionamiento y a veces también cambian sus propiedades físico-químicas.

Desnaturalización de una proteína
Las proteínas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional (conformación química) y así el característico plegamiento de su estructura.

Las proteínas son filamentos largos de aminoácidos unidos en una secuencia específica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinación requerida de aminoácidos por la instrucción genética. Las proteínas recién creadas experimentan una modificación en la que se agregan átomos o moléculas adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una vez que finaliza este proceso, la proteína comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontáneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuos hidrófobos de la proteína quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrófilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la proteína determina cómo interaccionará con el entorno.

Si la forma de la proteína es alterada por algún factor externo (por ejemplo, aplicándole calor, ácidos o álcalis), no es capaz de cumplir su función celular. Éste es el proceso llamado desnaturalización.


Cómo la desnaturalización afecta a los distintos niveles
En la desnaturalización de la estructura cuaternaria, las subunidades de proteínas se separan o su posición espacial se corrompen.
La desnaturalización de la estructura terciaria implica la interrupción de:
Enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminoácidos (como los puentes disulfuros entre las cisteínas).
Enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de aminoácidos.
Enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales no polares de aminoácidos.
En la desnaturalización de la estructura secundaria las proteínas pierden todos los patrones de repetición regulares como las hélices alfa y adoptan formas aleatorias.
La estructura primaria, la secuencia de aminoácidos ligados por enlaces peptídicos, no es interrumpida por la desnaturalización

Pérdida de función
La mayoría de las proteínas pierden su función biológica cuando están desnaturalizadas, por ejemplo, las enzimas pierden su actividad catalítica, porque los sustratos no pueden unirse más al centro activo, y porque los residuos del aminoácido implicados en la estabilización de los sustratos no están posicionados para hacerlo.

Factores desnaturalizantes
Los agentes que provocan la desnaturalización de una proteína se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes físicos (calor) y químicos (detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica). Como en algunos casos el fenómeno de la desnaturalización es reversible, es posible precipitar proteínas de manera selectiva mediante cambios en:

la polaridad del disolvente,
la fuerza iónica,
el pH,
la temperatura.

ULCERA PEPTICA

La úlcera péptica es una lesión en forma de herida más o menos profunda, que afecta a la pared interna (llamada mucosa) del tubo digestivo.Se localiza fundamentalmente en el estómago (úlcera gástrica) o en el duodeno que es la primera porción del intestino delgado (úlcera duodenal).

son 2 causas
infección por una bacteria llamada Helicobacter pylori

consumo de fármacos llamados antiinflamatorios no esteroideos (AINE) entre los que se encuentra el ácido acetil salicílico (AAS)

¿ QUÉ ES LA INFECCIÓN POR LA BACTERIA Helicobacter pylori?

Esta infección es probablemente la más frecuente en el ser humano. Esta bacteria se adquiere habitualmente en la infancia y vive durante muchos años en el interior del estómago pero no todas las personas infectadas desarrollarán una úlcera péptica: muchas convivirán con esta infección a lo largo de su vida sin que les cause problemas.

¿QUÉ SON LOS ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDEOS?


Son un grupo de medicamentos muy usados en el tratamiento de las enfermedades reumatológicas por sus propiedades analgésicas (antidolor) y antiinflamatorias. Entre ellos se encuentra el ibuprofeno o el naproxeno




CUÁLES SON LOS SÍNTOMAS DE LA ÚLCERA PÉPTICA?

El síntoma más común es el dolor o ardor en el abdomen. Este dolor aparece ya sea cuando el estómago está vacío, entre comidas o temprano en la mañana, aunque también puede presentarse a cualquier hora del dia. El dolor puede durar de unos cuantos minutos hasta horas y, en caso de úlceras duodenales, se alivia al comer algo o al tomar antiácidos.

Otros síntomas menos frecuentes son las náuseas, vómitos, eructos, distensión del abdomen, pérdida de peso o pérdida del apetito.




LA ÚLCERA PÉPTICA, ¿TIENE COMPLICACIONES?


Las principales complicaciones son tres:

Hemorragia digestiva: pérdida de sangre a través de la úlcera hacia el tubo digestivo. En este caso aparecen vómitos con sangre o con aspecto de "poso de café" o heces negras como el alquitrán.

- Perforación: cuando la úlcera es tan profunda que perfora la pared del estómago o duodeno.
- Estenosis: cuando la cicatriz que se produce en úlceras antiguas provoca una estrechez del intestino y dificulta el paso del alimento.




¿CÓMO SE DIAGNOSTICA LA ÚLCERA PÉPTICA?


Para confirmar la existencia de la úlcera se realiza la endoscopia oral, que consiste en el empleo de un tubo flexible (conectado a un video) que, introducido por la boca, permite ver el interior del esófago, estómago y duodeno.

Como alternativa puede realizarse una radiografia de contraste con bario del estómago y duodeno, que sin embargo es menos fiable que la endoscopia y no permite tomar biopsias que en ocasiones son precisas.

Una vez diagnosticada la úlcera péptica, es importante saber si fue causada por infección por Helicobacter pylori.

Existen tres formas de diagnosticar esta infección:
1) tomar fragmentos ("biopsias") de la mucosa gástrica o duodenal durante una endoscopia
2) realizar un análisis de sangre
3) realizar un test de aliento (prueba que consiste en analizar el aire espirado por el paciente)






Cuidados generales


1.- Debe llevar una vida normal
2- Su dieta no provoca o agrava una úlcera. Simplemente se recomienda no tomar aquellos alimentos que a cada uno "le sienten mal". Se aconseja no tomar café ni té, no fumar, ni ingerir bebidas alcohólicas ni tomar mucha leche.

Si tiene molestias puede ser aconsejable evitar el consumo de picantes, condimentos fuertes y salazones.

- Precauciones con los medicamentos


1.- Salvo en casos muy especiales, usted no debe tomar antiinflamatorios no esteroideos (AINE) ni ácido acetil salicílico (AAS).

2.- Si fuese imprescindible el empleo de AINE o AAS, probablemente su médico le recomiende que durante el tratamiento con éstos proteja la mucosa gástrica y duodenal con fármacos llamados inhibidores de la bomba de protones (IBP).

Consulte a su médico o farmacético sobre los medicamentos que puede tomar

Su médico le prescribirá el tratamiento, que consiste en la combinación de medicamentos que matan las bacterias (antibióticos) y disminuyen la secreción de ácido gástrico (antisecretor) protegiendo así el revestimiento del estómago.

Es recomendable que durante estos tratamientos y al menos un mes después tome yogures tipo "bio" (mínimo dos al dia) para reponer la flora bacteriana habitual del intestino.

Si la úlcera fue causada por infección por Helicobacter pylori el tratamiento logrará curarla y evitará casi por completo el riesgo de sufrir una nueva úlcera y las complicaciones asociadas a la misma

Si su úlcera fue causada por el consumo de AINE o AAS debe suspender, lógicamente, el consumo de estos

fármacos y para lograr la cicatrización de la úlcera se emplea habitualmente un IBP.

BENZOPIRENO

El benzopireno es un hidrocarburo policíclico aromático potencialmente carcinógeno (a-benzopireno) y que contienen algunos alimentos, como las carnes y el pescado.

El a-benzopireno pertenece a una clase de hidrocarburos aromáticos y que comparten una estructura química básica, el anillo de benceno. Son compuestos poco solubles en agua por tener propiedades hidrofóbicas consistentes en 2 o más anillos bencénicos, ya sea en forma simple o múltiple, formando cadenas o racimos. Ejemplos de hidrocarburo policíclico aromático son el naftaleno, el acenaftileno, el 1,8-Etilennafteno, el 2,3-Bencindeno, el Fenantreno, el Antraceno, el 1,2-Benzofenantreno y el antraceno.

En especial, el a-benzopireno es uno de los derivados de mayor factor de riesgo, tras largos periodos de consumo, puede desencadenar desórdenes celulares produciendo cáncer.

Esta considerada la novena sustancia más peligrosa debido a su potencial tóxico en la salud humana (CERCLA Priority List of Hazardous Substances de 2003).

El a-benzopireno se produce por condensación de cinco anillos de benceno durante los procesos de combustión a temperaturas de 300 a 600 ºC (incendios forestales, carbón, petróleo, grasas), en especial cuando estos son parciales. El consumo de tabaco es una fuente de benzopireno, así como algunos procesos industriales y algunos alimentos.



En 1775, en Inglaterra se relacionó la alta incidencia de cáncer en unas zonas determinadas con el hollín que desprendían las chimeneas de unas fábricas. Las investigaciones posteriores confirmaron que el culpable de las enfermedades era el benzopireno, un hidrocarburo policíclico aromático, insoluble en agua. Hierve a unos 310ºc.


Desde entonces se sabe que este residuo, producto de la combustión incompleta de materiales orgánicos, que proviene de derivados del petróleo y que es altamente cancerígeno. Está presente, por ejemplo, en los cigarrillos.


En el caso del aceite de orujo de oliva (constituido por una mezcla de aceite de orujo refinado y de aceites de oliva vírgenes) y del aceite de orujo de oliva refinado (obtenido mediante refino de aceite de orujo de oliva crudo), parece que los cambios que se han adoptado en su proceso de producción ha hecho que la sustancia aparezca.

A corto plazo, su consumo puede producir gastroenteritis, diarrea o dolor de estómago -lo que ocurriría al tomar una gota de gasolina sobre una rebanada de pan-, y a largo plazo puede desencadenar procesos cancerígenos, principalmente en el aparato digestivo si la ingesta es oral.

Puso como ejemplo de otros procesos que producen benzopireno la combustión de la gasolina sin plomo o de las pastillas de queroseno(obtenido por destilación del petróleo) que se utilizan para la barbacoa, pero hizo hincapié en evitar la alarma porque nadie respira todo el día el humo de un tubo de escape ni ingiere en cantidades suficiente productos así cocinados.

La presencia de los benzopirenos en los alimentos es frecuente, hay estudios que advierten, por ejemplo, de su presencia en la carne cocinada a la brasa, ya que durante su elaboración la carne está al alcance del humo producido por la combustión de las gotas de grasa que cae de la carne en las brasas.